單細(xì)胞技術(shù)作為一項(xiàng)新興的技術(shù),對(duì)于生命科學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展有著重要的作用。單個(gè)細(xì)胞的研究可以更好地理解細(xì)胞間的異質(zhì)性,便于發(fā)現(xiàn)與維持生命的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和機(jī)制。但隨著單細(xì)胞研究的深入,研究人員發(fā)現(xiàn)了許多問題。例如,單細(xì)胞數(shù)量的限制、難以控制的誤差、操作復(fù)雜,等等。這些難題都對(duì)單細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展產(chǎn)生了一定的阻礙。而單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒的問世,有效地解決了這些問題,具有推動(dòng)單細(xì)胞技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展的重要作用。 單細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)的基本原理
當(dāng)單個(gè)細(xì)胞分離出來后,由于細(xì)胞數(shù)量太少,難以完成一系列復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)過程,因此需要對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增,將單個(gè)細(xì)胞擴(kuò)增至足夠的數(shù)量,便于后期研究。在細(xì)胞擴(kuò)增的過程中,需要用到單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒產(chǎn)生必要的試劑,這些試劑主要包括:擴(kuò)增酶、核酸聚合酶(PCR)、輔因子等等。其中,PCR技術(shù)是其中最重要的一項(xiàng)技術(shù)。
PCR是一項(xiàng)利用DNA聚合酶反復(fù)復(fù)制以擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。此技術(shù)在細(xì)胞擴(kuò)增中的應(yīng)用主要是利用PCR反應(yīng)鏈特異性、自身復(fù)制和擴(kuò)增基于PCR原理的DNA。當(dāng)單細(xì)胞的DNA被擴(kuò)增之后,可以進(jìn)行更詳細(xì)的分析與監(jiān)測實(shí)驗(yàn),例如測序、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等等,從而更好地了解細(xì)胞內(nèi)的生物學(xué)特征。
單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒在細(xì)胞研究中的應(yīng)用:
單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒的問世促進(jìn)了單細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展并擴(kuò)大了單個(gè)細(xì)胞研究的范圍。其應(yīng)用場景主要有以下三個(gè)方面:
1、單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)是指獲取單個(gè)細(xì)胞中的RNA,通過RNA-Seq或Microarray測序等技術(shù)將其定量??梢灾苯荧@取單個(gè)細(xì)胞的獨(dú)特轉(zhuǎn)錄組信息,從而實(shí)現(xiàn)不同細(xì)胞類型、不同發(fā)育階段的基因表達(dá)水平的比較與分析。
2、單細(xì)胞基因組測序
單細(xì)胞基因組測序的意義在于,通過分析某一個(gè)細(xì)胞的基因組序列信息,可以突出這個(gè)細(xì)胞與其他細(xì)胞的區(qū)別,同時(shí)可以有機(jī)會(huì)突出一些細(xì)胞突變的觀察。其應(yīng)用范圍包括了腫瘤研究、缺陷顯性隱性繼承等等。
3、單細(xì)胞新生物質(zhì)和創(chuàng)傷表型特征分析
單細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒還被廣泛用于分析一些新生物質(zhì)如蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物的變化及其表型特征的分析,也可以用來研究一些不能舍棄的細(xì)胞中的特異性基因,并從這些特異性基因中提取精細(xì)的信號(hào)。