從導(dǎo)入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，可將轉(zhuǎn)染分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

瞬時轉(zhuǎn)染（transient transfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動物細胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上。瞬時轉(zhuǎn)染的基因表達是快速且短暫的，通常只能維持幾天。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質(zhì)表達，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細胞的基因組中，這種整合過程需要更長時間和更復(fù)雜的操作。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的基因表達是長期且穩(wěn)定的，因為外源基因會被傳遞給子代細胞。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于長期表達目標(biāo)基因的實驗，例如生產(chǎn)重組蛋白、進行基因敲除或敲入等研究。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也用于藥物篩選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等領(lǐng)域。

細胞轉(zhuǎn)染通常可分為三類途徑分別為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)。

物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學(xué)介導(dǎo)：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)技術(shù)等

生物介導(dǎo)：病毒介導(dǎo)，逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等

問題來了，該怎么選擇合適的轉(zhuǎn)染方法呢？

小編對這三個途徑的常用方法進行了總結(jié)，記得給小編點個收藏hahaha~

物理介導(dǎo)——電穿孔法

原理：電流能夠擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)。

優(yōu)點：原理簡單；不需要載體。

缺點：需要特殊設(shè)備，電流對細胞傷害非常大。

化學(xué)介導(dǎo)——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

原理：陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子進行包裹，形成DNA脂復(fù)合物，能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過細胞內(nèi)吞進入細胞。

優(yōu)點：操作比較簡單，轉(zhuǎn)染效率高。

缺點：需要進行條件優(yōu)化；有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染；對血清敏感；價格較高。

化學(xué)介導(dǎo)——陽離子聚合物

原理：與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原理相似，都是利用陽離子與核酸結(jié)合成復(fù)合物，利用細胞內(nèi)吞進入細胞內(nèi)。

優(yōu)點：在血清內(nèi)穩(wěn)定；對細胞毒性相對較低；轉(zhuǎn)染率高；性價比高。

缺點：需要對體系進行條件優(yōu)化；有些細胞體系不易轉(zhuǎn)染。

生物介導(dǎo)——病毒感染

原理：通過侵染宿主細胞從而將外源基因?qū)氲郊毎小?/p>

優(yōu)點：高轉(zhuǎn)染率；適用性廣。

缺點：需要對體系進行條件優(yōu)化；需要構(gòu)建病毒載體，步驟較為復(fù)雜。

然而，一種方法不會適用于所有的細胞和實驗，理想的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該根據(jù)自己的細胞類型和實驗需求來選擇。合適的細胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細胞毒性和對正常生理學(xué)的影響最小，且易于使用和可重復(fù)性等特點。

細胞轉(zhuǎn)染效率往往受到很多因素的影響，從細胞類型、細胞培養(yǎng)條件和細胞生長狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細節(jié)，都需要考慮，所以細胞轉(zhuǎn)染是一個常規(guī)但并不簡單的實驗。在進行轉(zhuǎn)染實驗時，需要注意以下事項：

細胞狀態(tài)：確保細胞處于良好的生長狀態(tài)，并在轉(zhuǎn)染前處于指數(shù)生長期。

轉(zhuǎn)染試劑選擇：根據(jù)細胞類型和實驗?zāi)康倪x擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染試劑。

DNA/RNA質(zhì)量：使用高質(zhì)量的DNA或RNA，并確保其大小適宜。

轉(zhuǎn)染時間：根據(jù)細胞類型和轉(zhuǎn)染試劑確定最佳的轉(zhuǎn)染時間。

健康細胞培養(yǎng)物和操作：保持細胞健康，避免RNA酶和其他污染源的污染。

純化RNA：在轉(zhuǎn)染前，使用適當(dāng)?shù)姆椒兓疪NA，以去除多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和鹽離子。

避免RNA酶污染：確保實驗環(huán)境中沒有RNA酶，防止對實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。

重復(fù)實驗：為了確保實驗結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性，需要進行多次重復(fù)實驗。

轉(zhuǎn)染效率檢測：轉(zhuǎn)染完成后需要對轉(zhuǎn)染效率進行檢測，對實驗數(shù)據(jù)進行正確的分析和解釋，避免因誤判而得出錯誤的結(jié)論。

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